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操作流程[2]
篇一:戴安娜血型官网
戴安娜手工配血系统血型鉴定试验操作程序
（以Diamed Confirm卡为例）
一．实验准备：将所有的试剂和样品平衡至室温；
1.凝胶卡处理：实验前，将新的Diamed Confirm卡离心，使微柱内壁上端粘有的凝胶离心下来；
2.病人红细胞：取病人抗凝血压积红细胞5μl加DianaSol 1溶液500ul，配成1%的红细胞悬液；
二、实验步骤：
1.缓缓地平行向后撕拉Diamed Confirm卡上端的锡纸膜，直至所需孔完 全露出为止；
2.在A、B、D、ctl四个孔内分别悬空加入病人红细胞悬液50μl；
3.将Diamed Confirm卡放到离心机中离心9min。
4.判读结果。
三、结果判定标准：
一 100%的红细胞沉在微管的底部
+/-
1+
2+
3+
4+
d.p. 100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内 80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内 80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内 80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内 凝集的细胞全部处于微管的顶部 双群
Hemo. 溶血
抗体筛查试验操作程序
（以Diamed Coombs卡为例）
一、实验准备：将所有的样品和试剂平衡至室温
1. 凝胶卡处理：实验前，将新的Diamed Coombs卡离心，使微
柱内壁上端粘有的凝胶离心下来。
2. 标准谱细胞：Serigrup Diamed I、II、III各一瓶，即0.8%
的标准谱细胞悬液（O型红细胞）。
3. 病人血浆
二、实验步骤：
1. 平行向后撕拉Diamed Coombs卡上端的锡纸膜，直至所需孔完全露出为止。
2. 在对应孔内分别悬空加入Serigrup Diamed I、II、III 悬液50μl。
3. 再在对应孔内各悬空加入病人血浆50μl。
4. 在孵育器内37℃下孵育15分钟。
5. 将卡放到离心机中离心。
6. 离心结束后在白色背景前观察结果。
三、结果判定：
一 100%的红细胞沉在微管的底部
+/-
1+
2+
3+
4+
d.p. 100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内 80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内 80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内 80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内 凝集的细胞全部处于微管的顶部 双群
Hemo. 溶血
孕妇IgG抗体筛查试验操作流程(手工法)
一． 中和血清配制
200ul孕妇血清＋200ul二巯基乙醇（2-Me），于37℃水育箱孵育30分钟；
二． 孕妇IgG抗体滴度检测
1.
2.戴安娜血型官网。
3.
4. 排4个小试管； 第1管： 1260ul生理盐水+20ul中和血清； 第2-4管：分别加入200ul生理盐水； 从第1管吸出200ul加入第2管，混匀，再从第2管吸出200ul加入第3管，依次倍比稀释（稀释倍数为1:64，1:128，1:256、1：512）；
5. 于Diamed coombs卡中加入1％A或B浓度标准红细胞50ul，再分别加50ul上述1-4管稀释血清，37℃孵育15min；
6. 于专用离心机离心9min。结果按出现1+的前一管的滴度报告。
三． 孕妇抗体筛查试验
1.
2. 取一张Diamed Coombs卡； 于第一孔中加入50ul 1% “O”型标准红细胞，再加入50ul孕妇的血清/血浆；
3.
4.
5. 将Diamed Coombs卡放入孵育器37℃孵育15min； 将Diamed Coombs卡放入离心机离心9min； 判读结果.如结果为阳性，则应用谱细胞作抗体鉴定，以确定抗体的特异性。
附： 二巯基乙醇（2-Me）的配置
1. PH 7.4PBS的配置:
KH2PO：4 1.73g
Na2HPO4：12H2O 19.35g
NaCl： 8.00g戴安娜血型官网。
加DH2O至1000ml
2. 0.2M 2-me应用液的配置：
1.6ml二巯基乙醇（2-Me）原液+100ml PH 7.4PBS（4℃保存一个月）
血型血清学试验带教步骤
篇二:戴安娜血型官网
重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
一组 带教教员
杨 民 主管技师
陈 瑛 技师
陈 敏 技师
一. ABO血型正反定型 二. Rh(D)抗原鉴定 三. 交叉配血；
一、ABO血型鉴定
ABO血型系统 正反定型，要求做玻板法与试管法。
1.玻板法： (1)取洁净玻板，用记号笔在正定型一侧注明抗-A、抗-B、抗-A（B）,
反定型一侧孔中注明A细胞、B细胞、O细胞，标记待检者姓名。
(2)在正定型一侧孔中先加入相应试剂血清1滴，再加入待检者20%～30%红细胞
悬液1滴；在反定型一侧先加入待检者血清2滴，再加入相应20%-30%标准红细胞1滴(取3-5人份的混合红细胞洗涤一次配成20%-30%红细胞混悬液)
(3)摇动玻板数次5min后观察结果，如有怀疑须做试管法对照。报告方式: 待检
者某某红细胞鉴定血型为×型。
2.试管法：（1）检查前整理检验台、试管架上只放待检者标本，查对标本与化验
单是否相符。（2）取6支试管（10×75mm），写上待检者姓名，3支用于正定型，分别注明抗-A、抗-B、抗-A(B)；3支用于反定型，要求标准悬浮红细胞用生理盐水配成2-4%，（洗涤1次的压集红细胞1滴加盐水1ml）。分别注明A细胞、B细胞和O细胞。（3）正定型试管中分别加入相应血型试剂1滴，再加待检者2-4%红细胞悬液1滴。（4）反定型试管中分别加待检者血清2滴，再加相应的2-4%红细胞悬液1滴。（5）将6支试管以3000rpm离心15s或1000rpm离心1min。（6）取出轻轻摇动，肉眼观察红细胞有无凝
二、 Rh(D)抗原鉴定 要求做玻板法与试管法
1．玻板法：取洁净玻板一块，用记号笔在左侧注明待检姓名，另两孔注明阴性、
阳性对照；将室温盐水反应的抗-D血清各加一滴于上述相应的孔内，1孔加入待检者20-30%红细胞悬液一滴，另两孔分别加Rh(D)阴性、Rh(D)阳性20-30%红细胞悬液1滴；用干净玻棒搅拌红细胞悬液和血型试剂充分混合；连续轻轻倾斜转动玻板，一般在5min内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。
结果判读：先看阴性、阳性结果是否相符，结果相符再看检测孔，结果相符才可出报告。
2．木瓜酶法：
（1）检查前整理检验台、试管架上只放待检者标本，查对标本与化验单是否相
符。待检者红细胞、Rh(D)阳性红细胞、Rh(D)阴性红细胞用生理盐水洗涤1次配成2-4%红细胞混悬液，（洗涤1次的压集红细胞1滴加盐水1ml）;
（2）取3支试管（10×75mm），写上待检者姓名，阴性对照，阳性对照，先加
抗-D试剂血清1滴，再分别加入相对应2-4%红细胞混悬液1滴。最后加1%木瓜酶液2滴;
（3）置37℃水浴箱中孵育20分钟;
（4）将3支试管取出以3000rpm离心15s或1000rpm离心1min;
（5）取出轻轻摇动，肉眼观察红细胞有无凝集;
（6）核对后填写登记本及报告单或输入计算机。
*Rh (D)阴性者,用不同批号抗-D重复做一次，再作间接抗人球蛋白试验,以免遗漏Du型和假阴性。待检者血清做不规则抗体筛查，鉴定抗体特异性。
三、交叉配血试验
1．聚凝胺法交叉配血试验
(1)试剂 ①LIM(低离子溶液)；②Polybrene（聚凝胺）③Resuspending(重悬液) ④
Positive control(阳性对照)；
(2)红细胞用生理盐水配成2-4%红细胞混悬液；
（3）方法：①取试管两支，1支标明主侧受者、供者姓名，加受者血清2滴，
加供者2-4%红细胞悬液1滴，另1支标明次侧，供者、受者姓名，加供者血清2滴，加受者2-4红细胞悬液1滴；②分别加LIM液9滴于试管中，混匀置室温1分钟，再加2滴聚凝胺液，混匀置室温15秒，1000rpm离心1min 弃上清，轻摇试管，肉眼观察有无凝集，无凝集要重复试验；
（4）有凝集再加2滴重悬液轻摇试管，肉眼观察有无凝集，如果在30秒钟散
开，为配血相合。若凝集不散开为配血不相合。若有可疑，要用显微镜观察， 必要时重复1遍；
（5） 登记配血结果。
2．戴安娜卡式配血系统
（1）取配血卡做好标记，受者与供者；
（2） 取献血者10μl压积红细胞加入1ml生理盐水中，配成1%红细胞混悬液
备用；
（3）将受血者血浆25μl加入戴安娜配血卡中；
（4）再加献血者1%红细胞混悬液50μl，低离子液25μl；
（5）37℃孵育箱，孵育15分钟后，专用离心机离心肉眼观察结果。红细胞网
在上面为阳性，红细胞沉到底部为阴性；
（6）登记、打印配血结果。
重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
二组 带教教员
张 红 技师
刁荣华 技师
陈寒梅 技师
四、 额外抗体筛查
1．用聚凝胺法戴安娜血型官网。
(1) 试剂 ①LIM(低离子溶液)；②Polybrene（聚凝胺）③Resuspending(重悬液) ④
Positive control(阳性对照)；
(2) 红细胞用生理盐水配成2-4%红细胞混悬液；
(3) 方法：①取试管3支，标明待检者姓名，谱细胞1、2、3号，加受者血清2
滴，分别加谱细胞2-4%红细胞悬液1滴，②加LIM液9滴于试管中，混匀置室温1分钟，再加2滴聚凝胺液，混匀置室温15秒，1000rpm离心1min弃上清，取出轻摇试管，肉眼观察有无凝集，无凝集要重复试验；
(4) 有凝集再加2滴重悬液轻摇试管，肉眼观察有无凝集，如果在30秒钟散开，为无额外抗体。若凝集不散开为有额外抗体。 有额外抗体，要用谱细胞鉴定抗体特异性。
2．卡式筛查（按交叉配血步骤进行）
重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
三组 带教教员
隆晓秋 主管技师
戚 超 技师
许 聃 技师
五. 抗-人球蛋白试验（coombs）
标本要求: 1.直接抗-人IgG试验，抽血1ml于抗凝瓶内摇匀。2.间接抗球蛋白试
验，不抗凝血3ml 参考值:健康人一般不凝集(阴性)。
1.直接抗球蛋白试验
(1) 待检者红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2-4%红细胞悬液。
(2) 对照细胞悬液：取抗-D抗体加O型Rh(D)阳性红细胞(2滴血清，1滴红细胞)，37℃致敏45min-1h，洗涤3次，洗涤后弃尽上清液，配成2-4%红细胞悬液。
(3) 阴性对照取O型红细胞洗涤3次，配成2-4%的备用。取试管3支，分别标明待检者姓名，阴性及阳性对照。
(4) 待检管加待检者2-4%红细胞悬液1滴，阴性对照及阳性对照管各加准备好的
阴、阳性2-4%红细胞悬液1滴。
(5) 然后每管加抗人球蛋白血清1滴，混匀，以3000rpm离心15s或 1000rpm离
心1min，观察结果。先观察阴性、阳性结果是否相符，再看被检管是否凝集，不凝集表示阴性、凝集表示阳性。
(6) 报告方式: 待检者某某直接抗球蛋白试验×性。
2.间接抗球蛋白试验